金歌聯合

解析丨(2019-nCoV)核酸檢測結果假陽性假陰性的原因

發布時間:05-28 | 作者: | 來源:| 16718:次圍觀

但新型冠狀病毒感染病例如何確診以及治愈標準一直是醫學界及公眾最為關注的問題之一。

目前,有不少媒體相繼報道,核酸檢測結果連續2次為陰性（隔日檢測）即可判定治愈。但是,近日武漢大學中南醫院醫生張笑春卻在朋友圈中不斷呼吁,推薦CT影像作為新型肺炎的主要診斷依據,希望不要太信任核酸檢測。此外,
2月4日,美國安德森癌癥中心肺科專家、終身教授張玉蛟發布文章表示,建議盡快建立CT做為新型肺炎的確診標準,提高新冠病毒檢測率。
2月5日,央視主持人白巖松在《新聞1+1》節目中,連線中國工程院副院長、呼吸與危重癥醫學專家王辰,介紹武漢疫情防控的最新進展。王辰表示,目前的檢測方式主要還是對于病毒核酸的檢測。

但新冠病毒有一個特點,并不是所有感染的患者都能測出核酸陽性的！

因此,有大量的看著流行病學史上、接觸史上像是,臨床癥狀上也像是,但是核酸未能得到確診的患者,現在被列為疑診病例。

王辰建議,在疫情非常突出和嚴峻的武漢地區,對于有流行病史,有典型的臨床癥狀的患者,應當可以列為臨床診斷病例。
因為核酸檢測即便是對確診病人,也不過只有30~50%的陽性率；也就是說,通過咽拭子這種檢測方式還是有很多假陰性的患者,即核酸沒有發現,卻是確診病例的患者。

2月5日
《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》發布,將“疑似病例具有肺炎影像學特征者”作為湖北省臨床診斷病例標準,提示湖北地區新型冠狀病毒診斷不再依賴核酸檢測結果。

這一診斷標準的改變,目前僅針對湖北地區疫情特殊情況,對于2019-nCoV的檢查,《新型冠狀病毒(2019-nCoV)感染的肺炎診療快速建議指南(標準版)》強烈推薦對于疑似患者進行CT檢查,以此結合核酸檢測進一步確診。

因此有網友質疑,核酸檢測這一技術在公共安全領域應用的可靠性。對此,我在這里為大家梳理一下目前2019-新型冠狀病毒核酸檢測結果假陽性、假陰性的原因,以期提高檢驗同行及臨床醫生對于核酸檢驗結果保障的理解,提高核酸檢驗結果的準確率。


下面小編來具體分析一下原因
1、標本采集問題
高質量的標本,才可能有高質量的檢驗報告
》標本采集采樣時機問題：
鼻拭子/咽拭子標本：患者發病3日內,可采集鼻拭子/咽拭子標本；
糞便標本：如患者發病早期出現腹瀉癥狀,則留取糞便標本。
》 標本質量問題（如采樣部位、采樣量）
》標本存放時間過長（病毒核酸降解）,使用不合適的保護劑等都會造成假陰性。研究顯示少數患者的感染部位僅限下呼吸道,而不在鼻咽部,所以咽拭子反復檢測都是陰性,而CT顯示癥狀不斷加重的情況是存在的,建議取下呼吸道的肺泡灌洗液用來做冠狀病毒核酸檢測。
咽拭子采集樣本直接影響病毒采集量。樣本采集方法不當,有可能造成無法采集到足夠數量的口、咽部細胞,從而采集不到足夠的病毒,導致病毒核酸拷貝數低,因此可能出現檢測結果呈陰性。
  保存液問題,RNA保存液導致病毒顆粒沉淀,回收率降低?；虮４嬉蝴}分高,導致裂解液無法有效釋放病毒核酸。

2、試劑盒問題
》純化問題：影響核酸提取純化的因素包括裂解效率,中和沉淀,結合效率,洗脫效率等。同時,洗脫產物若含太高的鹽份或乙醇也會對后續的PCR反應產生抑制作用。（注1：免疫細胞含有大量RNase 或使用的耗材、緩沖液含有環境中的RNase,裂解液不能完全滅活RNase,導致RNase污染。注2：冠狀病毒是單鏈RNA病毒,在高濃度GuHCl或GuSCN中容易降解,不宜暴露時間過長。）

 逆轉錄酶：與Taq酶相比,逆轉錄酶相對脆弱,活性保持或獲得高活性的逆轉錄酶相對不容易。純化制品中RNase污染也是要充分考慮的因素。
》 引物探針設計局限性,病毒變異位點在設計位點上。
》陽性對照品：需要注意的是,新型冠狀病毒是RNA病毒,由于RNA的制備困難,很多公司的陽性參考品就用構建的質粒DNA或者PCR擴增產物來替代,但是DNA不參與提取和逆轉錄的過程控制,所以不能起到嚴格意義上的陽性對照。
目前已見報道有公司申報注冊的試劑中,陽性對照品為包含Orf1ab基因、N基因、內標基因擴增序列的假病毒,可以模擬樣本中病毒核酸的原始狀態,能夠準確監控提取、逆轉錄、熒光定量檢測全流程。
還需要考慮到各個環節在核酸檢測中都能起到質控的作用,對于新型冠狀病毒來說,質粒DNA或PCR擴增產物的質控效果,只能在PCR擴增階段起作用,所以假病毒顆粒的作用非常重要。

3、實驗室
核酸提取過程要求精細操作,對操作人員技術有較高要求。如果操作不當,可能導致病毒核酸降解,最終導致檢測結果呈陰性。新冠病毒為單鏈RNA病毒,相對于DNA,RNA極易降解。細胞內源性RNA酶或者實驗室空間氣溶膠里所攜帶的RNA酶都可能導致降解。
 室內質控分為陽性質控和陰性質控。目前,定點檢測醫院可以利用陽性病人標本滅活后,或者利用提取的核酸標本制備批量的內部質控品,有的實驗室已經有制備了。而陰性質控可以使用試劑空白和非新型冠狀病毒感染病人的樣本等。
 冠狀病毒核酸檢測室間質評工作,這個目前還沒有開展,但這個非常重要。上海臨床檢驗中心積極推進本項工作,目前還沒有參加的實驗室,應該盡快參加。
 報告解讀與臨床溝通 ：實驗室進行核酸檢驗檢測的結果,要主動與臨床醫生溝通,實驗室結果要結合病史（是否到過武漢、是否接觸過武漢發熱患者等）、影像學表現,綜合分析；臨床醫生會結合患者的臨床癥狀、影像學、核酸檢測等結果進行判斷。當出現假陽性或假陰性結果,要尋找原因,并不斷改進。

總結如下表：